آنتاگونیست رسپتور اینترلوکین-۱ انسانی: کلونینگ، بیان و بهینه سازی در میزبان e.coli
نویسندگان
چکیده
مقدمه و هدف: آنتاگونیست رسپتور (il-1ra) il - 1 یک سایتوکاین ضد التهابی قوی است که باعث محدود کردن اثرات التهابی مربوط به اینترلوکین-1 (il-1) می شود. بعلت تشابه ساختمانی با il-1ra، il-1 به طور رقابتی به رسپتور il-1 متصل می شود ولی هیچ سیگنالی را القا نمی کند. بنابراین در درمان افراد مبتلا به بیماری های التهابی نظیر آرتریت روماتوئید بکار می رود. هدف از مطالعه حاضر کلون کردن، بیان و بهینه سازی بیان این پروتئین در e. coli می باشد. روش کار: دراین مطالعه تجربی قطعه ی ژنی سنتزی مربوط به il-1ra به وسیله pcr تکثیر داده شد. پس از برش دو آنزیمی، این قطعه در وکتور بیانی pet28a کلون گردید. بیان ژن مورد نظر ابتدا در سطح mrna به روش rt-pcr و سپس در سطح پروتئین به روش sds-page مورد برسی قرار گرفت و برای تایید پروتئین بیان شده از وسترن بلات استفاده گردید. بهینه سازی بیان نیز در غلظت های مختلف iptg و مدت زمان های مختلف بعد از القاء صورت گرفت. نتایج: به کمک روش کلنی-pcr و هضم دو آنزیمی، کلون شدن قطعه ی ژنی مورد نظر در وکتور بیانی pet28a مشخص شد. رونویسی از ژن کلون شده و بیان بالای پروتئین نوترکیب به ترتیب به روش rt-pcr و sds-page مشاهده شد. نتیجه ی حاصل از الکتروفورز پروتئین نیز با روش وسترن بلات تایید گردید. میزان بیان در غلظت های مختلف القاءکننده و مدت زمان پس از القاء بهینه سازی گردید. نتیجه نهایی: نتایج حاصل از مطالعه نشان دهنده ی بیان بالای این پروتئین در میزبانe.coli به وسیله وکتور بیانی pet28a بود. این مطالعه هم چنین نشان داد رابطه مستقیمی با افزایش بیان و مدت زمان برداشت سلول ها پس از القاء وجود دارد، لذا القاء با غلظت 1 میلی مولار iptg به مدت یک شب برای بیان بالای پروتئین پیشنهاد می گردد.
منابع مشابه
آنتاگونیست رسپتور اینترلوکین-1 انسانی: کلونینگ، بیان و بهینه سازی در میزبان E.coli
Introduction & Objective: Interleukine-1 receptor antagonist (IL-1RA) is a powerful anti-inflammatory cytokine which limits the biological effects of IL-1. Due to structural similarity between IL-1 and its antagonist, IL-1RA competitively binds to IL-1 receptor which leads to no signal transduction. Therefore , it is applied in the treatment of patients with inflammatory diseases such as Rheu...
متن کاملکلونینگ و بیان ژن اینترلوکین 11 انسانی در گیاه توتون
سرطان ها دومین عامل مرگ ومیر در جهان است. از روشهای مهم درمانی استفاده از شیمی درمانی در این بیماران می باشد. یکی از مشکلات عمده ای که بیماران در طول درمان با آن مواجه می شوند، کاهش میزان پلاکت خون است. کاهش پلاکت بیماران را مستعد خون ریزی نموده و در معرض خطر مرگ قرار میدهد. از جمله کار هایی که جهت رفع این عارضه در بیماران انجام می شود تزریق پلاکت است. اما این روش خطر ابتلا به عفونت های ناشی از...
کلون و بیان ژن رسپتور ویتامین btuB) B 12) از باکتری Ecoli O157 H 7
زمینه اهداف: تولید و شناسایی پروتئین اتصالی پری پلاسمی انتقال دهنده ویتامین B12) btuB) از باکتری ای کولی O157:H7. روش بررسی: ژن کد کننده btuB که مسئول تولید پروتئین انتقال دهنده ویتامین B12 است با موفقیت تکثیرگردید. این ژن با حذف کدون خاتمه به وکتور PET 28)a)+ اضافه شد تا His-tag از طریق وکتور به پروتئین اضافه شد. بعد از تنسفورم سازه در (DE3 (BL21 ،القا سلول با IPTG ،انالیز SDS- PAGE کل پر...
متن کاملکلونینگ و بیان دو سابیونیت اینترلوکین 27 انسانی
چکیده: اینترلوکین 27il-27) (یک سایتوکاین جدید است که یکی از اعضای مشترک خانواده های اینترلوکین 12و 23 به حساب می آید و به وسیله سلول های عرضه کننده آنتی ژن (apcs) ترشح میشود. هترو دایمری شامل دو سابیونیت p28و(ebi3) epstein-barr-induced gene 3 است. مطالعات اخیر ظرفیت های جدیدی را برای il-27 از جمله تحریک خون سازی، افزایش بروز آنتی بادی یه وسیله سلول های عرضه کننده آنتی بادی آنتی بادی(apcs)، سرک...
15 صفحه اولکلونینگ و بیان پروتئین M2 ویروس آنفلوانزا H1N1 در باکتری Ecoli سویه BL21(DE3)
سابقه و هدف: ویروس انفلوانزا A یکی از عوامل اصلی مرگ ومیر سالیانه می باشد و از سال 1960 میلادی بر علیه آن واکسن موثر در دسترس بوده است. تغییرات مداوم آنتی ژنیک ویروس چالش بزرگی در مسیر تولید سالیانه واکسن می باشد. در حال حاضر محققین روی آنتی ژنهای ثابت ویروس مطالعه می کنند. پروتئینM2 یک کانال یونی درون پوشش ویروس انفلوانزای A تشکیل می دهد که در عفونت زایی آن موثر است. این پروتئین حفاظت شده ا...
متن کاملکلونینگ، بیان و بهینه سازی محیط جهت بیان آنزیم فیتاز آسپرجیلوس نایجر در میزبان هانسنولا پلی مورفا
سابقه و هدف: آنزیم فیتاز توانایی تبدیل فیتیک اسید به میواینوزیتول و فسفات معدنی را دارا می باشد؛ از این رو به صورت گسترده ای به عنوان یک افزودنی در غذای حیوانات تک معده ای اضافه می گردد. هدف این تحقیق، کلونینگ، بیان و بهینه سازی محیط برای بیان آنزیم فیتاز آسپرجیلوس نایجر در میزبان هانسنولا پلی مورفا بود. مواد و روش ها: در این تحقیق، جهت دست یابی به مقادیر بالای تولید پروتئین، توالی ژن آنزیم ...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
عنوان ژورنال:
مجله دانشگاه علوم پزشکی همدانجلد ۲۱، شماره ۲، صفحات ۱۴۵-۱۵۱
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023